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在该配色方案中,通过用 CD45 染色鉴定所有淋巴细胞。从 CD45+ 细胞群中鉴定了 B 细胞 (CD19)、NK 细胞
(CD56) 和 T 细胞 (CD3)。此外,还使用 CD235 鉴定了成熟红细胞。进一步分析了 T 细胞群以确定效应 T 细胞
(CD8) 和辅助 T 细胞 (CD4)。使用 HLA-DR 和 CD45RA 分析这些 T 细胞群以确定亚群、幼稚 CD4 和 CD8 T
细胞以及活化的 CD8 T 细胞。
在SA3800全光谱流式系统使用405nm, 488nm and 638nm 三
激光检测固定人外周血全血十种抗体。所有细胞群体都通过前向角散射(FSC)和侧向角散射(SSC)然后CD45+设门后进
一步分型分析。
图 A 显示的是来自人 TBNK 样本的 CD45、CD3、CD4 和 CD8 的光谱曲线的单阳性对照叠加。与 TBNK 样本(图
B)相比时,各个单阳性对照叠加保持一致。CD4 Alexa Fluor® 647 和 CD8 Alexa Fluor® 532
用于区分样本中存在的辅助T细胞和毒性T细胞。
通过对固定的人淋巴细胞进行四色比较分析评估了分辨率和灵敏度。同一天在四台不同的仪器上使用同一样本。在运
行样本之前,对每台仪器进行了推荐的清洁和仪器 QC。与竞争产品相比,Sony SA3800 和 SP6800
光谱分析仪在阴性和阳性细胞群之间具有更好的分离效果。
此外,还进行了自发荧光去除的比较。每台仪器显示源自阴性细胞群的自发荧光细胞群。SA3800
能够识别该细胞群,使用自发荧光探测器为其创建单独的颜色,并减去该细胞群以便让用户能够查看真实细胞群。
在使用固定人血样的实验中,鉴定了 B 细胞 (CD19)、巨噬细胞 (CD33)、嗜碱性粒细胞 (CD123)、NK 细胞
(NKp46) 和辅助 T 细胞 (CD45/CD3/CD4)。此外,还使用 CD57 分析了较小的 NKT 细胞亚群。CD57 主要在阴性
CD4 细胞中表达,因为它与 CD8 杀伤性 T 细胞有关
细胞计数分析师使用多种形式的对照来确定来自异质细胞混合物的细胞群。在该示例中,通过光谱指纹全面分析了
6 色 TBNK 配色方案。通过比较单个阳性光谱指纹,减少了对用于识别细胞群的 FMO
对照的需求。此外,由于来自未染色细胞的自发荧光被处理为单独的颜色,因此将其减去以便能够轻松识别细胞谱系。